SPE技術儀器裝置固相萃取柱的重復使用

更新時間：2015-12-09

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SPE技術儀器裝置固相萃取柱的重復使用?

固相萃取柱生產廠商一般都強調其固相萃取柱是一次性使用的。但在實際工作中，人們為了降低成本往往希望固相萃取柱能夠多次使用。我們曾經對美國瓦瑞安公司生產的Bond Elut Certify 鍵合硅膠固相萃取柱的重復使用的可能性進行過評估 (J. Chromatogr. 137:619 ; 1993)。當樣品基液是漿時，這種固相萃取柱在經過再生后可重復使用2-3次 (保持80%以上的回收率)。也有人報道固相萃取柱可重復使用10次 (J. Chromatogr. 307:371 ;1986)。新型的薄膜型固相萃取柱的再生相對較為容易，反復使用的次數也會多一些。有人曾經試驗重復使用這種固相萃取柱15次之多。對固相萃取柱的重復使用在很大程度上取決于樣品基液的復雜程度。樣品基液越復雜，SPE柱重復使用的可能性就越小。

固相萃取膜片(SPE disk)的重復使用也是如此，在很大程度上取決于樣品基質。如果樣品中的干擾物在固相萃取膜片上不保留，或雖然保留，但通過一定的清洗、再生溶劑處理后能夠基本恢復其原有的功能，則可以考慮重復使用。有的可以重復使用高達10次。

對固相萃取材料的重復使用必須謹慎。首先，使用過的固相萃取柱必須進行再生。而且是在使用完后進行再生。其次，對再生后的固相萃取柱必須進行評估以保證其本底和回收率都可以接受。另外，還要考慮一下再生的成本是否值得。

SPE技術儀器裝置固相萃取柱的重復使用

11. 固相萃取中的常見問題

問題

原因

解決方法

在用反相SPE柱萃取時，洗脫餾份中有水。

1. 分析物洗脫之前SPE柱沒有很好的干燥。

1. 用氮氣或空氣干燥SPE柱：用20-100微升含60-90%甲醇的水將SPE柱上的殘留水分除去。

zui后餾份中含有干擾物。

1. 干擾物與分析物被同時洗脫。

2. 干擾物來自SPE柱。

1. 在洗脫分析物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱。可將兩種或更多中兼容的溶劑混合以達到不同的極性。

選用對分析物親合力更大而對干擾物親合力低的SPE柱。

用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱然后離子交換柱或硅膠柱。

2. 在柱子預處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。

SPE柱流速降低或阻塞。

1. 樣品存在過多的顆粒。

2. 樣品溶液粘度太大。

1. 對樣品進行過濾或離心。

2. 用溶劑對樣品進行稀釋。

反相柱從固態樣品中用萃取非極性分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用甲醇、異丙醇或乙腈對樣品進行均漿處理。然后過濾或離心，再用水對清液進行稀釋為含水量為70-90%的水溶液。

用正相柱從固態樣品中萃取分析物。

1. 分析物不在液體溶液中。

1. 用非極性溶劑 (如: 正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。

用正相柱從脂肪樣品中萃取分析物。

1. 脂肪可與分析物一起被洗脫出來或降低SPE柱的吸附容量。

1. 用正己烷溶解脂肪。冰凍除去凝結的脂肪。

用反相柱從含蛋白質的溶液中(、清、漿)萃取分析物。

1. 分析物與蛋白質鍵合使分析物通過SPE柱而沒有被保留。

1. 通過改變樣品的pH值或用水對樣品稀釋破壞蛋白鍵合。

2. 加酸除蛋白質 (如: HCIO4、TFA、TCA)。

3. 加有機溶劑除蛋白質 (如: 乙腈、丙酮或甲醇)。離心、然后用水或緩沖溶液將上清液稀釋至有機溶劑含量少于10%。

從含有表面活性劑的溶液中萃取分析物。

1. 表面活性劑與SPE柱表面起作用。

1. 如果分析物是非離子狀態，可用離子交換柱除去表面活性劑離子。

2. 用二醇基柱除去非離子化的表面活性劑。

用常規柱 (60Å)萃。取蛋白質的回收率低。

1. 蛋白質體積太大不能進入萃取柱的微孔。

2. 蛋白質不可逆地被吸附在反相SPE柱上。蛋白質在SPE柱擔體微孔內變性。

1. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

2. 用BAKERBOND大孔徑反相柱或離子交換柱。

分析物回收率低

被吸附在萃取柱上

(如分析物與基液一起通過SPE柱)

1. SPE柱沒有很好地被預處理。

2. SPE柱的極性不合適。

3. 分析物對樣品溶液的親合力遠遠大于對SPE柱的親合力。

4. 當大體積水樣品。

5. 通過SPE柱時，反相柱擔體失去柱子預處理時留下的甲醇。

1. 反相柱: 用甲醇、異丙醇或乙腈處理柱子，然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子。注意不能讓SPE柱變干。

2. 選擇對分析物有明顯選擇性的SPE柱。

3. 改變極性或樣品溶液的pH使分析物在樣品溶液中的親合力降低。

4. 在樣品溶液中加入1-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。

分析物回收率低

分析物沒有被洗脫出SPE柱

1. SPE柱的極性不合適。

2. 洗脫溶劑不夠強，無法將分析物從SPE柱上洗脫。

3. 洗脫溶劑體積太小

4. 分析物被不可逆地吸附在SPE擔體上。擔體-分析物作用力太強。

1. 選擇其它低極性或選擇性弱的SPE柱。

2. 改變洗脫溶劑的pH值以增加其對分析物的親合力。

3. 增加溶劑體積。

4. 反相: 選擇疏水性弱的擔體。如果原來用的是C18，則改為C8、C2或CN。

陽離子交換: 用羧酸取代苯磺酸。

陰離子交換: 用伯、仲胺代替叔胺。

萃取重現性差

1. 在添加樣品之前SPE柱已枯。

2. SPE柱超容量。

3. 樣品過柱流速太快。

4. 洗脫液流速太快。

5. 分析物在樣品中的溶解度太大，分析物在樣品過柱時與樣品同時通過柱子而沒有被保留。

6. SPE柱用極性溶劑處理而洗脫溶劑是不兼容的非極性溶劑。

7. 洗滌雜質用的溶劑太強，部分分析物與雜質同時被從SPE柱洗滌。分析物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速、SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。

8. 洗脫劑的體積太小。

1. 重新進行SPE柱預處理。

2. 減少樣品量或選擇大容量柱。

3. 降低流速。特別是離子交換時流速應低于5 mL/min。

4.在使用外力之前讓洗脫液滲透過柱。兩次500微升洗脫可能比一次1000微升更有效。

5. 通過改變樣品極性或pH值而改變分析物的溶解度。

6. 在使用非極性溶劑之前對SPE柱進行干燥。

7. 降低洗滌溶劑的強度。

8. 增加洗脫溶劑的體積。

SPE技術儀器裝置固相萃取柱的重復使用

參考資料：杭州聚同電子有限公司

固相萃取裝置原理及特點

固相萃取(Solid-Phase Extraction 簡稱ＳＰＥ)是近年發展起來一種樣品預處理技術, 由液固萃取和柱液相色譜技術結合發展而來 , 主要用于樣品的分離、純化和濃縮,與傳統的液液萃取法相比較可以提高分析物的回收率、更有效的將分析物與干擾組分分離減少樣品預處理過程，操作簡單，省時，省力。廣泛的應用在、食品、環保、商檢、農藥殘留等領域

⑴ 小心地取出固相萃取裝置，輕放于工作臺上。

⑵ 小心地取出SPE裝置上蓋板(輕拿輕放以免碰壞小管)，將標準試管插入真空倉內隔板孔中，然后，將上干蓋板蓋好，并保證蓋板下導流管與試管一一對應好，蓋板方形密封圈與真空倉有很好的密封性。如果不易密封，可用橡皮箍箍緊，以增加密封性。

如果選購了獨立調節就要先將調節閥插入蓋板萃取孔中；

⑷ 如果一次不需要做12或24個樣品，不用的萃取孔插上針管密閥；

⑸ 如選購了獨立調節閥，將不用的萃取孔的調節閥旋鈕旋到水平密封狀態；

將固相萃取小柱插入到上蓋萃取孔中或閥孔內（將調節閥旋鈕旋到直立打開狀態）；用膠管連接萃取裝置和真空泵，擰緊壓力調節閥門；

⑺ 將需要萃取的樣品或試劑分別注入到萃取柱中，啟動真空泵，則萃取柱中的樣品將在負壓力的作用下通過萃取柱流到下面的試管中。此時可通過調節減壓閥來調節控制液體流速。

（8）待針管內液體抽完后關閉真空泵，將富集柱從裝置上拔下，取下裝置上蓋板，拿出試管倒掉。

如不想用試管接液，可將試管架取出，放入合適大小的容器，*次萃取后取出倒掉。

再將干凈試管放入裝置，蓋好上蓋板，插好SPE小柱，用所需萃取溶劑加入針管，啟動真空泵，至液體抽干后關掉電源，取出試管備用。萃取制樣完畢。

將試管放入氮氣吹干儀中用氮氣吹掃濃縮，制備完畢。

處理好試管中的溶劑，并將試管沖洗干凈以備再用。

為了節省SPE柱的使用成本，每次使用后，應將SPE柱用淋洗液沖洗干凈，保證其填料的活性。

參考資料：杭州聚同電子有限公司